একটা স্লাইডে ব্যাকটেরিয়া নিয়ে তাকে ক্রিস্টাল ভায়োলেট রং এ রঞ্জিত করা হয় এরপর এতে আয়োডিন দিতে হয়।পরে একে অ্যালকোহলে ধুয়ে লাল রং এর কাউন্টার স্টেইন করতে হয়।এরপর একে অপটিক্যাল মাইক্রোস্কোপ এর নিচে দেখলে যদি বেগুনি বর্ণ( বিশেষ করে নীল থেকে বেগুনী) পরিলক্ষিত হয় তাহলে এটি গ্রাম পজিটিভ আর যদি বেগুনি না হয়ে স্যাফ্রানিন এর লাল বর্ণ (দেখতে গোলাপি থেকে লাল) তখন এটিকে বলা হয় গ্রাম নেগেটিভ। ।এর কারন হলো গ্রাম পজিটিভ এর ক্ষেত্রে বিবর্ণ পর্যায় বা ধুয়ে ফেলার সময় বাকি নমুনা থেকে স্টেইন ধুয়ে চলে গেলেও ঐ ব্যাকটেরিয়ার কোষ প্রাচীরের পুরু পেপটাইডোগ্লাইকান স্তর বেগুনি রংকে ধরে রাখতে পারে।যেমনঃ Cocci .অপরদিকে গ্রাম নেগেটিভ ব্যাকটেরিয়ার ক্ষেত্রে বিবর্ণ পর্যায়ে বেগুনী রং ধরে রাখতে পারে না কেননা এই পর্যায়ে ব্যবহৃত অ্যালকোহল ব্যাকটেরিয়ার বহিঃস্থ ঝিল্লিকে বিনষ্ট করে দেয় ফলে কোষ প্রাচীর টি ছিদ্রযুক্ত হয়ে যায় তাই ক্রিস্টাল ভায়োলেট রং ধরে রাখতে পারে না।তাছাড়া তাদের পেপটাইডোগ্লাইকান স্তর টি অনেক পাতলা এবং বহিঃস্থ ও অন্তঃস্থ কোষঝিল্লি স্যান্ডউইচকৃত অবস্থায় থাকে তাই তারা কাউন্টার স্টেইন গ্রহণ করে এবং লাল বা গোলাপি বর্ণ ধারন করে।যেমনঃ Samonella typhi,Bacilli ইত্যাদি।
